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纤维素酶活力用什么方法测定?

纤维素酶活力测定方法很多,主要原因是纤维素酶种类繁多、来源很广,不同来源的纤维素酶其结构和功能相差很大,其次纤维素酶作用的底物比较复杂,反应产物不同,致使纤维素酶活力的测定方法复杂而不统一。近年来随着多种交叉学科的快速发展,生物化学、分子生物学以及基因工程等相关领域的研究,促进了更多更新的纤维素酶活测定以及动力学研究方法的出现。

纤维素酶酶活测定方法——传统检测方法

曾报道过传统纤维素酶测定方法很多,如微晶纤维素酶活测定方法、滤纸酶活(FPA)测定方法、水杨什酶活测定方法、、染色纤维素法、滤纸崩溃法、棉线切断法、梭甲基纤维素钠盐(CMC-Na)酶活性测定方法、棉花糖法、CMC粘度降低法、荧光定糖法平板法。

纤维素酶系总的糖化能力的测定常见有三种

一是通过测定荧光物质的荧光强度的大小,来计算其还原糖含量的荧光法,其主要是根据还原糖与反应液生成荧光物质。

二是滤纸酶活(FPA)测定法,纤维素酶系总的糖化能力,通过以滤纸为底物经纤维素酶水解后生成的还原糖的量表征,因为滤纸是聚合度和结晶度都居“中等”的纤维性材料。

三是滤纸崩溃法,以滤纸完全崩溃为粉末状所需的时间来表征纤维素酶的活力,在容器内加入缓冲液和适当稀释的酶液,放入一定尺寸的滤纸条,一定温度条件下反复振荡。
三种纤维素酶活力测定方法

外切葡萄糖什酶活力的测定有棉花糖化法方法和微晶纤维素酶活测定方法两种。

两者均采用DNS显色法,通过计算还原糖的量来表征外切葡萄糖什酶活力,主要是利用纤维素酶降解微晶纤维素、棉。
纤维素酶中内切葡萄糖什酶对CMC-Na有降解能力,因此内切葡萄糖什酶活力的表征主要为CMC-Na酶活性测定方法。用标准葡萄糖溶液作标准曲线,通过DNS法显色,针对内切葡萄糖什酶与CMC-Na降解生成的葡萄糖等还原糖,以每分钟生成相当于1 I} mol的葡萄糖所需酶量定义为一个酶活性单位,使用分光光度计测其吸光度。

B一葡萄糖什酶活性的测定常用方法有三种:

一是将它们衍生为无荧光的底物,因为伞形酮(7一羚基香豆素)与4一甲基伞形酮具有强烈荧光的特点,使用荧光法进行测定;

二是Banish和Swiain法,它以水杨什作底物,使释放出来的水杨醇显色(或DNS显色),酶解产物用4一氨基安替比林作显色剂,再用分光光度法比色测定;

三是以对一硝基苯一I}一葡萄糖什为底物进行酶解,底物水解后释放出的配基对硝基苯酚可直接在100}120nm波长范围内测定。

纤维素酶活力测定方法

纤维素酶酶活测定方法——传感器检测方法

与新型先进技术相比,传统方法进行还原糖以及多糖雷竞技的酶活测定,还是存在一定缺点,虽然其操作相对简便、快捷。如实验步骤复杂,灵敏度低,有颜色底液严重干扰,重现性差。而生物传感器适应于复杂体系的实时及在线测定,具有快速测定、简便易携、高灵敏度、高专一性,而且检测样品一般可反复多次使用、不需另加其他试剂、不需要预处理、不要求样品清晰度等优点,在监测与控制中显不出巨大的优势。

纤维素酶酶活测定方法——压电生物传感器监测

谐振器吸附待测物后频率的变化来检测待测物,主要是利用压电石英谐振器对质量的敏感性,是近二l一年来发展起来的一种新型生物传感器。这类传感器最大的优点是不需要任何标记,具有响应灵敏、选择性好、仪器简单、操作方便、便于自动化等优点,成为生物传感器领域的研究热点之一,因此引起了人们的浓厚兴趣。

电化学酶传感器主要由固定化酶膜和电极组成。固定化酶膜可以催化被“识别”出的物质发生化学反应,进行选择性地“识别”被检测的物质,电极则通过仪表显不出来这一催化反应中底物或产物的变量转换成的电信号。3小结不同来源纤维素酶,其组成及各组分的比例有较大的差异。仅运用传统方法对其研究己是远远不够的。而传感器灵敏度高、选择性好、操作简单,正逐步趋向微型化、阵列化,其作为近年发展起来的可对所分析物质进行快速、准确、实时检测的新力-法,越来越广泛地应用在研究监测领域中。在己有的相关工作基础上,为今后研制出生产实践过程中纤维素酶酶活在线快速测定方法提供了一定意义和指导作用。



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